Sensitivity of polymerase chain reaction for detection of known aliquots of Trypanosoma cruzi in the blood of mice: an in vitro study

To evaluate the sensitivity of polymerase chain reaction (PCR) to reveal known number of trypomastigote in the blood of mice, three separate experiments were done. First: To eight samples of 500mul of normal mice blood, one aliquot of 1, 2, 3, 4, 5, 10, and 50 trypomastigotes respectively, were added. Second and third: 10 aliquots with 1 and 10 with 2 trypomastigotes were added to samples of 500mul of normal mice blood. Positive control: 500mul of blood containing 100,000 trypomastigotes. For kDNA minicircles amplification by PCR the primers:S35 and S36 were used. PCR revealed products of 330 b.p in the positive controls. When only one sample with the aliquots of 1 or 2 trypomastigotes was examined, results were negative; results were positive with aliquots of 3 to 50 trypomastigotes. In the 2nd and 3rd experiments, 9/10 aliquots with one parasite and 9/10 with 2 trypomastigotes were positive revealing a high sensitivity of this reaction. In conclusion, the presence of one single parasite in 500mul of blood, is enough for a positive PCR. This method could be used as a complement to the various parasitological cure tests in treated mice, when low volumes of blood are individually examined

Biodemes and zymodemes of Trypanosoma cruzi strains: correlations with clinical data and experimental pathology

With the objective of establishing biological and biochemical characteristics of a significant number of Trypanosoma cruzi strains from different geographical areas, 138 strains isolated from naturally infected humans, triatomine or vertebrate hosts were studied; 120 were isolated from different areas of Brazil and 18 from other South and Central American countries. Inocula from triatomine or culture forms were injected into suckling Swiss mice, followed by passages into mice 10 to 12 g. Biological characters and histopathological study permitted the inclusion of the strains into three Types or biodemes: I, II, III. Isoenzymic analysis confirmed a correspondence between the biodemes and zymodemes: Type I and Z2b, Type II and Z2, Type III and Z1. Results showed the ubiquitary distribution of the several types of strains. The predominance of the same Type and zymodeme in one geographical area was confirmed: Type II strains among the human cases from eastern Bahia and east of Goiás; Type III strains from humans of north Brazil and Central America and from silvatic vectors or vertebrates from other geographical areas. The biological types of strains correlate with different histopathological lesions considering cardiac involvement and neuronal lesions. These findings suggest that the biological behavior together with isoenzymes patterns and pathological pictures in the vertebrate host can be an important tool for establishing correlations between strains behavior and clinico-pathological manifestations of Chagas' disease in different geographical areas.

Investigation on the possibility of spontaneous cure mice infected with diferent strains of Trypanosoma cruzi

Setenta camundongos suicos, cronicamente infectados com diferentes cepas do Trypanosoma cruzi, cuja parasitemia se manteve negativa ao exame de rotina do sangue periferico, foram investigados parasitologicamente com o objetivo de verficar se houve cura espontanea dos mesmos. A duracao da infeccao variava entre 90 e 250 dias quando os camundongos foram inicialmente investigados. Os testes parasitologicos usados foram: pesquisa direta de parasitos no sangue periferico, feita diariamente, durante pelo menos 25 dias, seguida de xenodiagnostico e subinoculacao do sangue em camundongos recem-nascidos. Os camundongos que mostraram resultados negativos foram tratados com uma dose de Ciclosfofamida de 250mg/kg peso corporal foi aplicada aos camundongos cronicamente infectados tiveram testes parasitologicos positivos em diferentes etapas da presente investigacao. Concluimos que neste grupo representativo da fase cronica da infeccao por diferentes cepas do T. cruzi, nao ocorreu cura espontanea.

Estudo do comportamento de cepas de Trypanosoma cruzi após passagem em diferentes espécieis de triatomíneos / Behavior of Trypanosoma cruzi strains after passage in different triatominae species

Foi estudada a influência da passagem em diferentes espécies de triatomíneos de cepas do T. cruzi biologicamente distintas, mantidas em camundongos. Cepas: Peruana (Tipo I), 12 SF (Tipo II), Colombiana (Tipo III), Triatomíneos: Rhodnius prolixus, Panstrongylus megistus e Triatoma ingestans. Ninfas do 4§ estágio foram alimentadas em camundongos infectados com as respectivas cepas e obtidos os inóculos (10**4 formas metacíclicas) para infecçäo de camundongos de 8 a 10g. Grupos experimentais para cada cepa: I - Controles inoculados com formas sanguícolas; II, III, IV - inoculados com metacíclicos de P. megistus, T. infestans ou R. prolixus, respectivamente. Os perfis de parasitemia foram mantidos para cada cepa, com piques mais elevados nas infecçöes com metacíclicos do P. megistus e do R. prolixus, para a cepa Peruana, do P. megistus para a 12 SF e do R. prolixus, para a Colombiana. O histotropismo e o padräo de lesöes foram mantidos para três tipos de cepas. O grau de virulência da cepa Peruana foi idêntico em todos os grupos e variou para as cepas 12 SF e Colombiana de acordo com a espécie de triatomíneo usada, com predominância de formas delgadas, nos inoculados com formas metacíclicas o que foi interpretado como uma fase adaptativa das formas metacíclicas ao hospedeiro vertebrado

Terapêutica da fase crônica da infecçäo experimental pelo Trypanosoma cruzi com o benzonidazol e o nifurtimox / Therapy of the chronic phase of the experimental infection by Trupanosoma cruzi with benzonidazole and nifurtimox

Foram submetidos à quimioterapia com Nifurtimox (Bay 2502) ou com o Benzonidazol (Ro7-1051) cinqüenta e oito camundongos cronicamente infectados com diferentes cepas do Trypanosoma cruzi (Tipos II e III) por períodos de 90 a 100 dias. Vinte e um camundongos cronicamente infectados foram utilizado como controles näo tratados. Os inóculos variaram ente 1 x 10***4 e 5 x 10***4 tripomastigotas sanguícolas. O tratamento foi feito durante 90 dias, nas doses de 200 mg/Kg/dia durante 4 dias, seguidas de doses de 50 mg/Kg/dia, para o Nifurtimox e de 100 mg/Kg/dia, para o Benzonidazol. Os resultados dos testes parasitológicos (xenodiagnóstico, subnoculaçäo do sangue e hemocultura), nos camundongos tratados com Benzonidazol, mostraram 85,3% de negativaçäo nos animais infectados com as cepas de Tipo II e 43% com as cepas de Tipo III. Nos camundongos tratados com o Nifurtimox observou-se 71,4% de cura parasitológica nos infectados com as cepas de Tipo II e 66% nos infectados com as cepas de Tipo III. Os testes de IFI permaneceram positivos em 90% dos animais tratados e curados. Houve regressäo total ou parcial das lesöes miocárdicas e de músculo esquelético nos animais tratados e curados. Em 50% dos animais em que os testes de cura permaneceram positivos, houve persistência de lesöes histopatológicas discretas. Conclui-se que o tratamento na fase crônica pode determinar negativaçäo parasitológica em percentagem elevada de casos, compáravel ao obtido na fase aguda, com as cepas de Tipo II e mais elevadas com as cepas de Tipo III, com persistência da positividade da IFI

Aspectos imunológicos da infecçäo de seis linhagens isogênicas de camundongos por três diferentes cepas do Trypanosoma cruzi / Immunological aspects of infection of 6 inbred strains of mice by 3 different strains of Trypanosoma cruzi

Foram avaliados aspectos da imunidade humoral e celular em seis linhagens de camundongos isogênicos (BALB/c, B-10, C3H, A/J, AKR e DBA) infectados por três cepas do Trypanosoma cuzi, representantes dos três tipos de cepas da classificaçäo de Andrade (cepas Peruana, 21SF e Colombiana). A imunidade celular, avaliada pelo teste de hipersensibilidade cutânea tardia contra antigenos do parasita, estava suprimida. A avaliaçäo dos níveis de imunoglobulinas (imunodifusäo radial), mostrou queda precose de IgG1 e elevaçäo de IgM em praticamente todas as linhagens infectadas por qualquer das cepas estudadas. A elevaçäo de IgG2a e/ou IgG2b foi mais intensa nas linhagens mais resistentes. Os níveis de anticorpos anti-T, cruzi (Imunofluorescência indireta e ELISA) näo se correlacionam com a sobrevida dos animais. Apesar de diferenças entre as linhagens observou-se uma regularidade na resposta do hospedeiro e a manutençäo dos padröes biológicos que caracterizam os tipos de cepa

Comportamento das cepas Y e Peruana do Trypanosoma cruzi no camundongo, após passagem em diferentes meios / Behavior of the Y and Peruvian strains of Trypanasoma cruzi in mice, ofter passage through different media

Com o objetivo de verificar se o comportamento morfobiológico e histopalógico de cerpa do Trypanosoma cruzi é mantido após modificaçöes no seu meio de manutençäo e multiplicaçäo, foram estudados oito grupos de infecçäo experimental em camundongos com as cepas Y e Peruana, após manutençäo nas seguintes condiçöes cultura acelular em meio de Warren, criopreservaçäo em Nitrogênio líquido durante trinta dias, passagem em triatomíneos e passagem em camundongos. Os parâmetros avaliados foram: parasitemia, mortalidade, sobrevida, morfologiaq dos parasitos no sangue periférico, tropismo tíssular e lesöes histopatológicoas. Tanto com a cepa Y como Peruana, cada grupo experimental foi dividido em dois subgrupos de acordo com a dose de inóculo, sendo um inoculado com 10.000 e outro com 50.000 formas tripomastigotas, menos o inoculado com formas de triatomíneos em que o inóculo foi apenas com 10.000 tripomastigotas. Observou-se na infecçäo pela cepa Y, retardo na evoluçäo da parasitemia nos inoculados com formas de cultura e atenuaçäo de virulência com o inóculo de 10.000 formas. Os caracteres básicos da cepa foram mantidos com predominância de macrofagotropismo na fase inicial da infecçäo e miotropismo nas fases tardias,predominância de forma delgadas e elevada patogenicidade, com 100% de mortalidade embora com variaçäo nos periodos de sobrevida. Na infecçäo pela cepa Peruana observou-se também retardo da evoluçäo da parasitemia com o inóculo de 10.000 formas provenientes de triatomíneos, de cultura e de criopreservaçäo. Entretanto, as características morfológicas, o tropismo tissular e a patogenicidade foram mantidos